Microscopio versátil que permite tres modos de trabajo atendiendo a las necesidades:

a. Microscopía confocal,
b. Microscopía Súper-Resolución Lightning (hasta 120nm resolución lateral)
c. Microscopía nano- resolución STED (resolución lateral mejor que 50nm; resolución axial mejor que 130nm).

 

Objetivos disponibles:
El equipo cuenta con 5 objetivos dispuestos en el revolver y otros dos intercambiables disponibles bajo petición del usuario.

Objetivos dispuestos en estativo:

- 10x/ 0.45 DRY
- 20X/ 0.75 DRY
- 63X/1.40 OIL
- 93X/1.30 GLYC
-100X/1.40OIL

El objetivo 93x está especialmente indicado para STED aunque también puede ser utilizdo en el resto de microscopías.

Los objetivos 10x y 20x permiten el trabajo a larga distancia  

Objetivos disponibles a solicitud de usuario interesado: 

-40x/1.30 oil
-63x/1.20

 

Sistema de Iluminación:

1. Diodo 405nm
2. Láser blanco: permite la selección de la longitud de onda con diferencia de incluso 1nm en rango de excitación amplio ( desde 470 a 670  nm)

La incorporación de láser blanco al equipo supone novedad y ventaja importante puesto que permite mayor eficacia en la excitación de fluorocromos.
Además, trabaja de modo coordinado con sistema Gating que permite la medición de tiempos de reflexión y autofluorescencia.

El sistema anterior es imprescindible para mejora de resolución en sistema STED.

 

Detectores disponibles:

Sistema dotado de 4 detectores para fluorescencia y un detector para luz transmitida.

1. Dos detectores PMT
2. Dos son detectores híbridos: proporcionan mauor sensibilidad, ausencia de ruído fotónico y posibilidad de medición de tiempos de emisión de fluorocromos (herramienta gating).

 

Sistemas de aumento de velocidad:

1. Trabajo bidireccional con buenos resultados
2. Trabajo con scanner resonante: limitar su uso para investigación célula viva pues implica disminución de resolución y otras limintaciones

Modos de visualización de contraste disponibles:
Todos los objetivos dispuestos en el equipo permite el trabajo con las siguientes técnicas de contraste:

1. Contras de de fases
2. DIC
3. Luz polarizada

 

Elementos que permiten y facilitan la experimentación in vivo:

a. sistema de control y registro de parámetros ambientales: temperatura, CO2 y humedad
b. sistemas de autofoco basado en:  medida de reflexión,  selección del mejor foco para canal seleccionado o mediante combinación de los dos sistemas mencionados
c. sistema scanner resonante

 

Posibilidades de trabajo:

1. Realizar escaneos y obtención de mosaicos de forma casi inmediata
2. Fijar posiciones al azar o seleccionadas por observador para la adquisición
3. Técnicas de adquisición de pocesos dinámicos:
4. FRAP (Fluorescence Recovery After Photobleaching)
5. FRET (fluorescence resonance energy transfer)

 

MODO DE TRABAJO SUPER-RESOLUCION LIGHTNING
Requisitos de la muestra:

1. No se requiere preparación especial
2. Se requiere buena se;al y muestra de calidad para obtención de buenos resultados

La superación del límite de refracción se consigue por combinación de una optimización de la adquisición con la aplicación de algoritmos matemáticos sobre el resultado que permiten la deconvolución de la imagen.
MODO DE TRABAJO SUPER- RESOLUCIÓN STED

Requisitos de la muestra:
No cualquier muestra es válida ni permitirá resultados óptimos. Se incluye enlace a documentación informativa acerca de recomendaciones de procesado y marcajes a utilizar Guide to STED Sample Preparation
Como norma general podemos afirmar que se requieren buenos marcajes que proporcionen señal lo suficientemente brillante.

Laseres de depleción disponibles:
El equipo cuenta con dos láseres de depleción, con emisión en la siguiente longitudes de onda: 592nm y 660nm.
Lo anterior permitirá estudios de colocalización. Revisar Guide to STED y consultar con Servicio Técnico para selección de fluorocromos