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UNIDAD DE MICROSCOPÍA IPBLN GRANADA


MARCAJE AVANZADO Y DE ALTA ESPECIFICIDAD

Las técnicas de etiquetado avanzado buscan superar las limitaciones de los métodos convencionales, como el uso de anticuerpos secundarios (tamaño elevado del inmunocomplejo) o colorantes inespecíficos. Ofrecen mayor especificidad y precisión molecular nanométrica, así como un incremento de la estabilidad óptica. Lo anterior justifica la idoneidad de este tipo de etiquetado en técnicas de súper- resolución como microscopía STED. El empleo de un etiquetado avanzado y de elevada precisión, nos permite aprovechar al máximo el potencial de las técnicas de súper- resolución STED.

Algunos ejemplos de este tipo de marcaje son los nanobodies y los quantum dots.


Nanobodies

Los nanobodies (Nb) son fragmentos de anticuerpos derivados de la cadena pesada de las IgG de camélidos o de peces cartilaginosos. Poseen propiedades únicas a nivel funcional y estructural: un tamaño pequeño, se pueden diseñar para que presenten una alta especificidad de unión al antígeno, son estables en condiciones extremas, fáciles de producir, y poseen un potencial diagnóstico y terapéutico prometedor.

El marcaje con Nb permite disminuir la distancia entre el fluoróforo y el antígeno a detectar, lo que permite la localización precisa de las dianas de interés. Además, estas biomoléculas pueden emplearse como anticuerpos secundarios para amplificar señales de forma más controlada y eficiente. Al unirse con gran afinidad a anticuerpos primarios y portar fluoróforos o enzimas, concentran más moléculas reporteras por sitio de unión, aumentando la intensidad de señal.

Quantum dots

Los quantum dots son nanoestructuras compuestas por materiales semiconductores con capacidad de emitir fluorescencia a distintas longitudes de onda. Su estructura permite que se conjuguen con proteínas oligonucleótidos, moléculas pequeñas, etc., lo que permite dirigirlas frente a las moléculas de interés.

Una de sus principales ventajas es que emiten una luz muy brillante y estable y que presentan un espectro de emisión muy específico, lo que evita las superposiciones de espectros cuando se emplean en combinación con otros fluoróforos y permite la realización de ensayos multiplex donde se marcan diversas estructuras de forma simultánea. Por último, presentan una mayor resistencia al photobleaching que los fluoróforos convencionales.

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