Fluorescence Recovery After Photobleaching (FRAP)
La técnica FRAP (Fluorescence Recovery After Photobleaching) es un método que permite medir la cinética de difusión lateral de membranas biológicas que contengan sondas marcadas con fluoróforos. Esta técnica es especialmente útil en estudios de difusión de membrana y unión de proteínas.
En primer lugar, se toma una imagen de la membrana antes de realizar el photobleaching, lo que debe dar lugar a un marcaje uniforme del fluoróforo. Tras esto, la fuente de iluminación del microscopio se focaliza sobre un área pequeña (usando un objetivo de mayor aumento) y se provoca un fotoblanqueo sobre la región designada (se destruye de forma fotoquímica el fluoróforo de manera que no podrá emitir más luz). El resultado visible será el de un campo de visión con fluorescencia uniforme con una región sin fluorescencia. Trascurrido cierto tiempo, y debido al movimiento browniano, las sondas fluorescentes que aún emiten luz difundirán a través de la muestra y sustituirán a aquellas que habían perdido la fluorescencia.
