Purificación automática de ácidos nucleicos
- DNA plasmídico
- DNA genómico a partir de cultivos celulares o sangre
- RNA total a partir de cultivos celulares o sangre
Solicitud
FORMULARIO DE DATOS DE FACTURACIÓN
| datos_de_facturacion.doc |
FORMULARIO DE SOLICITUD DE SERVICIO DE PURIFICACIÓN DE ÁCIDOS NUCLÉICOS
| solicitud_pur.doc |
Preparación y entrega de muestras
Purificación de DNA plasmídico:
Se entregará un volumen de hasta 5 ml de cultivo bacteriano en fase de crecimiento exponencial. Cuando el volumen de cultivo sea inferior a 1.9 ml, las muestras se entregarán directamente en tubos de 2 ml (sin faldón) claramente rotulados en el lateral y en la tapa. Para volúmenes mayores, las muestras se entregarán en los tubos adecuados igualmente rotulados.
Las muestras serán entregadas directamente al personal de la Unidad o, en su defecto, depositadas en el estante señalizado a tal fin, ubicado en la zona de 4 grados del frigorífico del laboratorio de Secuenciación. Las muestras deberán ser acompañadas por la hoja de solicitud adecuadamente cumplimentada y firmada que será depositada en la bandeja correspondiente situada a la entrada del laboratorio.
Purificación de RNA total:
Las cantidades de material de partida deberán estar acorde con las siguientes especificaciones:
- Tejidos: 20-30 mg.
- Parásitos: 4x10e7-5x10e7 células.
- Células mamífero: hasta un máximo de 5x10e6 células
Tejidos: Las muestras de tejido se entregarán correctamente homogeneizadas y lisadas en 350 ml de buffer RTL (proporcionado este último por la Unidad).
Cultivos celuares: Las células se recogerán y centrifugarán siguiendo el protocolo habitual. El pellet celular se estabilizará en 10 volúmenes de RNA later o similar en tubos de 2 ml (fondo cónico sin faldón). Las muestras así preparadas serán depositadas en una gradilla habilitada para tal fin ubicada en el frigorífico del laboratorio de Secuenciación en la zona de 4 grados.
En caso de no utilizar estabilizador, las células se recogerán y centrifugarán siguiendo el protocolo habitual. El pellet celular se congelará de forma inmediata a -80ºC y se conservará en este estado hasta ser entregado directamente al personal de la Unidad para su inmediato procesamiento. En este caso se ruega contactar con el personal de la Unidad de forma previa a la entrega para una mejor coordinación.
Es imprescindible especificar en la hoja de solicitud si se desea tratamiento en columna de la muestra con DNase I (convencional o doble).
Las muestras deberán ser acompañadas por la hoja de solicitud adecuadamente cumplimentada y firmada que será depositada en la bandeja correspondiente situada a la entrada del laboratorio.
Purificación de DNA genómico:
-Parásitos:
La cantidad de material de partida será de aproximadamente 7,5x10e7 células. Las células serán centrifugadas siguiendo el protocolo habitual. Una vez sedimentadas, las muestras serán conservadas en hielo y entregadas a la Unidad para su procesamiento inmediato o bien, si esto no fuera posible, serán congeladas y mantenidas en este estado hasta su procesamiento. Las muestras deberán ser entregadas en tubos de 2 ml (fondo conico en “U” sin faldón)
- Cultivos celulares (células de mamífero):
La cantidad máxima de material de partida será de 5x10e6 células.
Las células se recogerán y centrifugarán siguiendo el protocolo habitual. El pellet celular se resuspenderá en 100 μl de PBS 1x y se transferirán a tubos de 2 ml de fondo cónico y tapón de rosca.
Las muestras así preparadas serán entregadas directamente al personal de la Unidad o depositadas en una gradilla habilitada para tal fin ubicada en la zona de 4 grados del frigorífico del laboratorio de Secuenciación. Las muestras deberán ser acompañadas por la hoja de solicitud adecuadamente cumplimentada que será depositada en la bandeja correspondiente situada a la entrada del laboratorio.
- Sangre a partir de 200 μl.
Las muestras se entregarán en tubos de 2 ml de fondo cónico sin faldón y tapón de rosca que se depositarán en la gradilla habilitada en la zona de 4 grados del frigorífico del laboratorio de Secuenciación. La hoja de solicitud debidamente cumplimentada se depositará en la bandeja correspondiente situada a la entrada del laboratorio.
Recogida de muestras
Una vez finalizado el proceso de extracción, se procederá a la cuantificación de las muestras mediante espectrofotometría tras lo cual serán congeladas. Los usuarios serán avisados telefónicamente o a través de correo electrónico para que pasen personalmente a recoger sus muestras por el laboratorio de Secuenciación. El horario de recogida será de lunes a viernes de 9 a 13:30 horas.