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UNIDAD DE PROTEÓMICA IPBLN

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  Servicios ofertados:

 

  • Determinación de masa molecular (MW) con MALDI-TOF y ESI-IT

    Este tipo de análisis se realiza a partir de muestras en disolución. Las muestras pueden ser proteínas, péptidos, moléculas de pequeño o mediano tamaño, oligonucleótidos de ADN/ARN y otros tipos de polímeros. Se procederá al desalado o eliminación de interferentes si fuese necesario, y se obtendrá el espectro de masas en el rango de masas especificado con un espectrómetro MALDI-TOF o ESI-trampa de iones (ESI-IT).

  • Identificación de proteínas por huella de masas peptídicas (PMF) y fragmentación peptídica (PFF) con MALDI-TOF/TOF

    A partir de proteínas separadas en gel (1D o 2D), o purificadas por cromatografía líquida. El procedimiento estándar incluiría: Recorte automatizado de la banda o mancha (spot) de la proteína, y su posterior destinción y lavado (si se parte de proteínas separadas en geles de SDS-PAGE 2D o 1D), proceso de reducción, carbamidometilación, digestión enzimática con tripsina, "clean-up" o limpieza, cristalización, obtención de la huella peptídica con MALDI-TOF (PMF), procesado de datos e identificación mediante búsqueda en bases de datos con el motor de búsqueda MASCOT .

    Para confirmar las identificaciones realizadas por PMF, las muestras también pueden ser analizadas por fragmentación de péptidos (PFF) con MALDI-TOF/TOF, realizando la correspondiente búsqueda en bases de datos.

  • Identificación de proteínas con nLC acoplada a espectrometría de masas en tándem (nLC-ESI-IT o nlc-msms).

  • A partir de muestras de proteínas de diversa complejidad, los péptidos resultantes de su digestión enzimática pueden ser analizados en un nanocromatógrafo acoplado a un espectrómetro de masas tipo trampa de iones (nLC-ESI-IT). El procedimiento incluye la carga en un mini-gel, recorte de la banda, proceso de reducción, carbamidometilación, digestión enzimática con tripsina, inyección y separación en el nLC, análisis con el espectrómetro de masas, procesado de datos e identificación mediante búsqueda en las correspondientes bases de datos con el motor de búsqueda MASCOT.

  • Separación de proteínas en mini-geles de poliacrilamida y tinción de geles.
  • Escaneado de geles y obtención de imágenes, recorte de "spots" de proteínas separadas en geles de poliacrilamida, y transferencia a microplacas.
  • Digestión tríptica de proteínas y desalado de muestras mediante resinas C4/C18 (SPE)
  • Cromatografía líquida con FPLC
  • Asesoramiento y asistencia técnica en:

           - búsquedas en bases de datos de proteínas, a partir de datos de ms y msms.
           -   separación de proteínas mediante electroforesis mono y bidimensional (SDS-PAGE).
           -   tinción y escaneado de geles.
           -   cromatografía líquida en columna.

           -   experimentos utilizando la tecnología DIGE.



          Para más información, contactar con la Unidad de Proteómica