• Los  citómetros de flujo analizadores sólo podrán ser utilizados por  el personal del Centro, para ello deberán ponerse en contacto con la persona responsable del mismo.

• Los NUEVOS usuarios tendrán que utilizar los citómetros bajo la supervisión del técnico, y como mínimo hasta que adquieran la suficiente soltura con el funcionamiento y limpieza de los equipos. Para ellos, es muy recomendable, descargarse el tutorial de iniciación a la citometría, y el manual de uso de los equipos.
  

• La utilización de los citómetros se realizará por turno estricto de reservas. Los turnos de reserva serán de 9-21H de lunes a domingo. Si un experimento así lo requiriese, si se comunica y se solicita al personal del Servicio, se pueden solicitar reserva de los equipos con mas de una semana de antelación, haciendo uso de las hojas de reserva así dispuestas para ello. La facturación por uso se realizará por tiempo real de uso de citómetro, y no por tiempo reservado. Por ello y por comodidad para todos los usuarios, se aconseja la mayor coincidencia posible entre tiempo reservado y tiempo efectivo de uso. Por las tardes, se pedirá la llave de acceso a las dependencias del servicio en conserjería anotándo el tiempo de uso.

• La adquisición de datos será prioritaria respecto al análisis de los resultados. Por ello, el análisis se podrá hacer siempre que no haya otro usuario que deba pasar muestras.

• El último usuario anotado es el responsable del lavado largo  y apagado (descritos en el manual) del correspondiente equipo. En caso de cancelación de su reserva, deberá comunicarlo al usuario anterior  o, si éste ya ha finalizado, lavar y apagar el citómetro igualmente. IMPORTANTE: En caso de que el último usuario de la tarde, no hiciera uso de su tiempo de reserva ni lo lavase y/o apagase, (y no lo hubiera comunicado al tècnico responsable ni al anterior usuario del equipo) quedando por ello, el citómetro encendido toda la noche debido a este hecho, se hará un recuento de horas desde su tiempo de reserva hasta las 8.00 de la mañana del día siguiente, y dichas horas le serán facturadas.

• Cualquier duda, fallo o problema de funcionamiento de cualquiera de los equipos debe ser comunicado con la mayor brevedad posible al personal del servicio

    

  Los citómetros pueden medir con alta sensibilidad la dispersión de luz y la fluorescencia emitida por las células o partículas presentes en una mezcla heterogénea, para esto las células deben estar suspendidas de forma uniforme en un medio, el cual debe ser isotónico, aproximadamente de pH 7.4 y, para una máxima eficiencia a una concentración de 105-106 células/ml para equipos de citometría analítica.
El primer paso para la preparación de la muestra consiste en la obtención o producción de las células en suspensión, y el segundo en el mantenimiento de las funciones y propiedades celulares. Sin embargo cuando usamos o desarrollamos un protocolo es importante siempre comprobar la preparación mediante microscopía (incluidos los controles) y asegurarse de que estamos trabajando con un método reproducible y sin artefactos. Es obvio que cuando estamos algunas características o funciones celulares (exclusión de muertas, fagocitosis, citotoxicidad...) es necesario usar células vivas, suspendiéndolas en un medio fisiológicamente correcto y examinarlas lo antes posible, sin embargo ésta no es razón para que estas células vivas se puedan usar para otros estudios como marcaje extracelular o moléculas de adhesión.
El PBS se usa frecuentemente para el mantenimiento celular in vitro de períodos breves, pero si esto es para un período mas largo es conveniente que contenga alguna proteína (HEPES) para el mantenimiento del pH durante varias horas.  Algunos medios de cultivo (ej. RPMI) tambien se pueden usar pero siempre que no contengan rojo fenol, ya que éste produce fenómenos de quenching, atenuando la señal por un aumento de la señal del fondo. y mantenerlo a 5% de CO2 y con HEPES.Algunas proteínas adecuadas pueden ser 0,5-5% de BSA
Además para estudio de marcaje inmunológico, suele ser recomendable 1% de suero o 100ug/ml o inmunoglobulina de la misma especie como anticuerpo primario para el bloqueo de receptores Fc. Algunos antígenos de superficie (cd14, cd16, cd32, Tnf alfa) se pueden liberar por enzimas presente en suero y/o por enzimas endógenas que pueden ser activados por anticuerpos o por unión al receptor)
Si las células, tienden a agregarse pueden mantenerse en suspensión mediante medios libres de cationes divalentes (Ca2+, Mg2+) que contengan 5mM de EDTA. Sin embargo ello puede resultar perjudicial para la supervivencia celular.
Trabajar siempre a 4ºC, siendo recomendable filtrar las muestras previamente a su paso por el citómetro y OBLIGATORIO a su paso por el sorter.
Para una muestra más limpia es conveniente efectuar técnicas de aislamiento (centrifugación en gradiente de densidad, columnas) u otros procedimientos como lisis de eritrocitos (uso de NH4-Cl)

Debido a la complejidad de utilización del Sorter, el citómetro de flujo separador solo podrá ser utilizado por el personal del Servicio de Citometría, como uso de separador. Como uso de analizador, el personal del Servicio impartirá cursos de entrenamiento a quien así lo desee para uso del mismo.
Los usuarios que quieran hacer Sorting deberán rellenar la solicitud correspondiente, y enviársela al personal de citometría.
La distribución de los Sortings, se regirá por un turno estricto de reservas.
La entrega de las muestras para la separación celular, deberá hacerse llegar al responsable durante los horarios previstos a tal fin y siguiendo sus especificaciones.
Todo Sorting se facturará desde la hora acordada para comenzar hasta la hora de finalización (en tramos de 30 minutos), más una hora extra, que es el tiempo estimado para la puesta en marcha, lavado y apagado.
En el supuesto de que en un mismo día se hicieran separaciones de distintos grupos de investigación la hora extra de facturación se repartirá entre ellos.
En caso de cancelación de Sorting el mismo día que lo tiene adjudicado, se le facturará al menos una hora (encendido y apagado), si el equipo ya se hubiera puesto en marcha.

Requisitos básicos en la preparación de muestras
Antes de pasar las muestras, filtrarlas en filtros de aproximadamente 30 micras de poro o por tubos de citómetro con filtro (el servicio los proporcionará)
Concentración y volúmenes adecuados para realizar un sorting (siempre que se pueda), aproximadamente entre 10-15 millones de células viables  por mililitro y un máximo de 2ml por tubo. Traer volumen de sobra para crear los settings adecuadamente sin perder muestra.
Preparación de tubos de recogida: al menos 30 minutos a 37ºC con medio o solución de staining (PBS + suero). Tubos de 12x75 mm de polipropileno (más libres de carga estática que los de poliestireno y mejores para los procesos de separación) que el servicio proporcionará en su defecto
Mantener las muestras siempre en hielo y oscuridad
Es OBLIGATORIO preparar controles negativos, positivos y/o de isotipo